近年来，随着病理学研究的不断深入，多重免疫荧光(mIHC)技术正逐步兴起。mIHC是一种可以在一张组织样本上实现多重分子标记的免疫标记技术，有助于确定靶标的亚细胞定位、识别多种细胞类型以及解决生物标志物的相对接近度，是研究蛋白质表达、细胞标志物以及分子间相互作用的重要工具。

Bioss将自主研发生产的高性能荧光染料与TSA酪胺信号放大技术结合，重磅推出高灵敏度的多重免疫荧光产品mIHC试剂盒，帮助您实现对低丰度靶标的可靠检测与成像，为您的高分文章增添色彩！

让我们先来欣赏几张使用Bioss mIHC试剂盒得到的多色图像。

肠癌组织

人脑组织

大鼠脑组织

小鼠脑组织

技术原理

酪酰胺信号放大(Tyramide signal amplification, TSA)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行高密度原位标记的酶学检测方法。其原理是利用酪胺的过氧化物酶反应，酪胺荧光素底物在HRP和H₂O₂的作用下被活化，产生的活化荧光底物能与目标蛋白的蛋白残基共价结合，导致在抗原-抗体结合位点大量沉积荧光素，实现信号放大。通过热修复处理，将前一轮非共价结合的抗体洗掉，而荧光素稳定结合在蛋白上，进行下一轮染色。直至所有抗体孵育结束，进行核染色，封片，扫描。

技术优势

相比于传统的IF来说，多重免疫荧光的染色分辨率更高，荧光信号更强、更加稳定，并且不限制一抗种属，大大降低了实验成本。

实验步骤

mIHC试剂盒产品线

产品优势

试剂优化：本试剂盒中的修复/速除二合一缓冲液效果远胜普通修复液，显著杜绝“串染”、“过修复”现象；快速反应缓冲液使反应体系不再依赖H₂O₂，将反应时间从10-20 min缩短至10 sec-5 min；水晶封片剂采用抑制气泡配方及增强型防淬灭配方，有效防止封片过程产生气泡，并使TSA荧光可保存6个月-2年。

信号稳定：TSA标记是稳定的共价结合，荧光信号稳定，基本不受连续孵育、热修复和抗体剥离处理影响。

操作简单：可以使用同一种属的不同一抗搭配同一二抗使用，解除抗体种属限制，降低了实验设计的难度和复杂性；多轮单染，每轮独立互不干扰，极大减少了交叉反应对实验设计和实验结果的影响；简化了实验流程，提高了实验效率。

节省样本：一张切片可进行多重靶标深度分析，节约珍贵样本。

高分辨率及低背景：抗体更高比例的稀释能够降低非特异性结合。

多靶标同时检测与分析：mIHC技术能够在一张切片上同时检测多个靶标，可以同时获取关于细胞定量、细胞亚群分型、细胞空间排列等多个类型的信息，提供了更全面的组织分析。

高精准度：mIHC技术避免了多张切片间比较可能带来的不连续性误差，提供了更高精准度的结果。

空间位置信息的分析能力：mIHC技术易于对空间位置信息进行分析，探究标记物的共定位情况、表达量和空间关系，对于理解细胞间的相互作用和肿瘤微环境至关重要。

灵活的分析方式：mIHC技术的多靶标染色结果可以灵活地进行自由组合分析，也可以单独拆分信号进行分析，能够根据实验目的和数据分析需求来定制分析方案。

定量分析：mIHC染色结果可以配合智能图像分析软件使用，进行多参数分析，实现定量评估细胞密度、表型和定位等。

高特异性和高灵敏度：TSA信号放大，灵敏度高达传统方法的100倍，能够检测到更低浓度的靶标，甚至是一些传统方法无法检测到的低丰度蛋白。