发表者：北京博奥森生物      发表时间：2018-11-19

本期导读：样本的制备是IHC实验成功的前提条件。样本完成石蜡包埋后，需要成约3-4um的薄片。本文主要介绍了切片小技巧及过程中容易出现的16种问题（点击获取全部列表）进行了一一分析。

切片小技巧

① 组织切片，旧刀修片，新刀切片。

②切片厚度3-4μm（淋巴结、扁桃体、鼻咽、扁桃体2-3μm；脂肪5-6μm）

③切片毛笔应顺着刀背往刀锋扫。

④切片动作轻，用力均匀。

⑤室温、冷冻等温度要适宜，易于切出薄片。

⑥刀片锋利，切片角度5°最佳，切片平整无褶皱和收缩。

⑦切片方向：纤维、肌肉走向与切片平行；原则为软→硬，易→难，主→次。

⑧蜡块表面有钙点，应20%HCL表面泡1-2h，水洗后切。

⑨切片人员应细心操作，防划伤，切后维护保养机器。

展片、捞片、烤片注意事项

☞切片光面朝下展片、捞片。

☞避免切片被污染。

☞摊片水温利于展平又不熔化，必要时用20%酒精摊片。

☞用镊子辅助将组织贴在玻片合适的位置。

☞细小组织（穿刺、内镜小标本）可以多贴几个。

☞玻片干净，防止脱片（血块、脑组织、脂肪）。

☞在烘烤切片前应做好排水，烤片温度高于石蜡熔点5-10℃。

切片常见的16种问题及解决方法

问题1 细胞皱缩和收缩；核“起泡”变大损伤；胶原染色嗜碱性

原因：石蜡温度过高。

解决方法：烤箱温度高于石蜡熔点5-10℃为佳。

问题2 切片卷成致密团

原因：①刀钝；②倾斜角太小；③切片太厚。

解决方法：①换新刀片；②如果间隙角充分，降低倾刀的斜度。

问题3 切片破碎或切不成片

原因：①组织固定、脱水、透明不彻底，浸蜡不透；②浸蜡包埋温度过高或时间过久。

解决方法：①优化组织处理；②及时更换试剂；③重新脱水补救；或者重取。

问题4 过分的压缩

原因：①刀片钝；②组织或石蜡过软；③用力太猛，速度太快。

解决方法：①换刀片，移刀锋；②使组织表面变冷，重新切取；③动作轻，用力均匀。

问题5 切片不成连片
原因：①刀刃不锋利，刀间隙角度大；②蜡块内组织上下端留蜡边太少或不整齐，刀边碎片；③室温过低或石蜡过硬。

解决方法：①移动刀口或更换刀片，检查刀的角度，清洁刀片和刀架背面；②在低熔点的石蜡中重新包埋；③提高室内温度或温暖蜡块表面（哈气等）；④切片厚度适宜（根据组织类型）。

问题6 切片易粘附与组织块

原因：①间隙角不足；②室温过高或包埋石蜡熔点低；③刀片、组织块边缘的碎片；④组织带静电。

解决方法：①增加间隙角；②清洁刀边；③修剪组织块的边缘；④湿润切片机周围的空气，地上洒水，开启加湿器；⑤放置静电防护器或切片机附近放置干燥板。

问题7 切片条带弯曲不直

原因：①蜡块上下两面不平行；②蜡块下边与刀口不平行；③切片处刀锋不一致；④组织本身硬度不一致。

解决方法：①重新修整蜡块，使上下两边平行；②将蜡块移正，与刀口保持平行；③移动刀片或更换刀片；④修去组织较软侧的蜡块。

问题8 蜡块组织脱落

原因：①在粗修蜡块时，先放组织后放蜡，否则组织与包埋蜡块黏贴不牢；②蜡块冻时间过长，切片时易出现蜡块脱落现象。

解决方法：①包埋先放石蜡后放组织，速度尽可能快；②切片动作小、匀速。

问题9 组织切片不完整，缺损

原因：①取材时未取中病灶，组织块太大，太厚；②多块组织包埋是排列不佳；③组织块内组织不平坦；④组织包埋方向失误；⑤切片时粗修过多（切削过深）或过少（没切到足够的深度）。

解决方法：①组织太大，脱水 不好，取材厚度3mm为佳；②组织在包埋模中均匀铺平；③熟悉各种组织的切片特点，避免包埋方向的失误（囊壁、管腔竖直包埋）；④切片方向：软到硬，易到难，主到次。

问题10 切片过厚

原因：①切片机维护不当，切片厚度设置错误；②石蜡太软（熔点低）；③石蜡过热；④刀钝。

解决方法：①降低切片厚度设置；②定期校准和保养；③使用适合组织类型和密度熔点的石蜡；④常规病理组织切片厚度在3-4μm，淋巴结、脾脏、胸腺、鼻咽组织等含巴细胞成分较多的组织，薄切2-3μm，脂肪5-6μm。

问题11 切片纵裂，损伤，刀痕

原因：①组织中钙化点、钉、缝合线或纸屑等异物；②刀片缺口；3刀口不洁，含有毛屑、碎组织、皮棉或石蜡等；④石蜡中有杂质。

解决方法：①更换刀片或移动刀口；②使用面脱钙方法（20%HCl）；③仔细清洁刀刃以除去多余的石蜡堆积；④如果石蜡中有异物，用干净的石蜡重新包埋。

问题12 切片厚薄不均匀/跳刀/百叶窗/搓衣板

原因：①组织脱水过度；②切片刀不锋利，刀间隙角（或倾斜度）太大；③切片速度太快

④切片机部件松动或磨损；⑤组织致密或坚实；⑥主轴伸出太长。

解决方法：①处理过程中减少脱水时间；②更换刀片，减少倾斜度；③哈气；④均速慢切；⑤确保刀和组织的有关螺丝拧紧夹牢；⑥主轴摇回复原。

问题13 褶皱/折叠

原因：①摊片温度不合适，组织未充分伸展；②刀片不锋利，刀角度大；③石蜡熔点低，过软或室温较高；④组织缺乏一致性。

解决方法：①调小刀角度，边切边向蜡块吹气用10-20%酒精摊片，利用浓度差，水的张力来展片；②检查摊片水温，太冷不易展开；太热会产生褶皱或折叠，组织细胞散开；③更换刀片或移动刀口；④切片厚度是否合适。

问题14 切片裂缝/碎裂

原因：①组织固定和处理不完全，摊片是发生裂解；②摊片水温过高，摊片时间长导致过度延伸；③摊片时镊子撑开过大；④烤片前切片排水不净。

解决方法：①确保固定和处理完全；②在摊片时轻轻延伸蜡带，去除褶皱和折叠；③降低摊片水温（通常低于包埋蜡熔点的5-10℃）；④在切片和漂片过程中，小心操作蜡带；⑤在烘烤切片前应很好的排水。

问题15 栅状裂和龟裂

原因：①固定、透明、浸蜡不充分；②摊片水温过高；③过度脱水，去除了蛋白质结合的水，组织发脆，当漂浮在水面上是可能会裂开；④切片过程中过度冷冻。

解决方法：①优化组织脱水过程；②降低摊片水温；③切片过程中勿使用冷却喷雾剂，细胞易缩小；④匀速慢切，边切边对蜡块吹气。

问题16 切片中有气泡

原因：捞片时切片下面有气泡。

解决方法：①保持温水干净，无杂质；②切片要干净无污染；③捞片前将组织下的气泡赶走。