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文章摘要

仿生伪装技术利用天然细胞膜作为药物载体，在药物动力学和生物相容性方面均优于合成材料，是一种很有发展前景的安全纳米药物。然而，目前为止科学界仅有少数研究者致力于设计这种仿生伪装技术，使其具有一些附加或优化后的特性——特别是对药物传递系统“智能化”至关重要的特性，如刺激响应性药物释放。本文描述了一种pH响应的仿生“血小板”，用于肿瘤特异性药物传递和肿瘤触发性药物释放。这种血小板纳米载体将血小板膜与功能化合成脂质体结合，由于其以血小板膜为基础，因此表现出较高的肿瘤亲和力，并能根据溶酶体室的酸性微环境选择性释放其载物。在小鼠肿瘤模型中，它显示出明显优于无pH响应的血小板或基于传统pH敏感性脂质体的纳米制剂的抗肿瘤效果。本文介绍了一种将刺激响应特性融入仿生纳米颗粒的简便方法，展示了工程细胞膜作为仿生伪装物用于新一代生物相容、高效纳米载体的潜力。

实验思路

实验背景

血小板膜包裹的纳米颗粒具有血液循环中的隐蔽性和生物友好性，以及显著有效的肿瘤靶向性。据推测，后者是源于血小板和肿瘤细胞之间的强烈亲和力，这种亲和力是由一系列分子相互作用介导的，例如血小板CD62p与肿瘤细胞表面过度表达的CD44受体的特异性结合。此外，CD62p还是血小板膜表面蛋白成分中大量存在且常用的一个标志物。

实验名称

Western blot 分析血小板膜标志物CD62p

实验目的

检验脂质体挤出器共挤出的方法是否成功将血小板膜整合到PEOz-platesome-Dox纳米颗粒上，纳米颗粒与血小板膜上的蛋白质分布是否存在差异。

实验方法

①收集处理各组的血小板膜蛋白样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳；

②进行凝胶上蛋白样品的转膜；对膜蛋白样品进行封闭，一抗（兔抗鼠CD62p）孵育和二抗（羊抗兔IgG-HRP）孵育，清洗；

③最后用触摸成像系统进行曝光鉴定和拍照。

研究结果

实验结果

如下图所示，利用Bioss产品——Anti-CD62p进行孵育，可以清晰地看到在不同纳米制剂组都存在CD62p的蛋白条带，信号明显且单一。

实验结论

Western blot实验证明了我们成功将血小板膜Platelet与酸响应脂质体PEOz-liposome 通过共挤出整合到了一起。CD62p抗体在验证PEOz-platesome成功合成中发挥着非常重要的鉴定作用。PEOz-platesome的成功制备为我们后续的体外细胞实验和体内抗肿瘤实验打下了基础。

总结

对于给定类型的细胞膜，可转移到伪装纳米材料上的生物功能是有限的，并且许多特性对于药物载体特别理想，例如特定靶向性、刺激反应性和药物控制释放，通常不会转移到未经修饰的细胞膜涂层上。到目前为止，大多数具有工程功能的仿生纳米系统都是通过在预先设计好的纳米颗粒核上进行伪装来构建的。而本研究通过把细胞膜涂层功能化，将pH敏感的脂质DSPE-PEOz结合到血小板中，以加速抗癌药物阿霉素 (dox)在酸性环境中的释放。同时，通过水合作用将阿霉素包裹在颗粒内。这种构建药物载体的方式，在保留其仿生特性的同时，又赋予其额外的功能，未来在生物医学应用领域也会有无限潜能。

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