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【赏文】恭喜浙江大学医学院蔡志坚课题组发表文章于《Journal of Extracellular Vesicles》-北京博奥森生物技术有限公司
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【赏文】恭喜浙江大学医学院蔡志坚课题组发表文章于《Journal of Extracellular Vesicles》
发表者:北京博奥森生物      发表时间:2021-11-25

文章信息



文章名称:Neddylation of Coro1a determines the fate of multivesicular bodies and biogenesis of extracellular vesicles.

发表期刊:J Extracell Vesicles. 2021 Oct;10(12):e12153.

影响因子 (IF) 25.841

本文应用 Bioss 产品

Rabbit anti-Rab7 Cat: bs-6703R

文中检测种属: Human;应用: Cryo-EM

图片来自原文FIGURE 6. (e)


Rabbit anti-UBE2F Cat: bs-8378R 

文中检测种属Human,Mouse;应用WB


图片来自原文FIGURE 4.(a) 




研究背景

胞外囊泡 (EVs) 根据其大小和来源主要分为两类:微囊泡和外泌体。微囊泡是从质膜向外出芽脱落,形成直径在 50nm ~ 1μm 之间的微囊泡、微粒和大囊泡。外泌体是由内体途径产生的直径在 30nm ~ 150nm的小的囊泡,作为细胞之间独特的传递载体,参与多种疾病的过程,包括发育,免疫,组织稳态,肿瘤和神经退行性疾病等。因此,深入探究以外泌体为代表的胞外囊泡的生物发生的调控机制是治疗这些疾病的潜在策略,同时也对于其作为诊断标记物和治疗性药物载体有着重要的临床意义。在 EV 的亚群外泌体的生物合成过程中,多囊泡体 (MVBs) 或者与溶酶体融合而降解,或者与质膜融合释放管腔内囊泡形成外泌体,MVBs 的命运直接决定了外泌体的生物发生。然而,MVBs 如何靶向至溶酶体以及质膜融合的机制仍有待深入研究。蛋白质的翻译后修饰在 EV 的生物发生中起重要的调节作用。Neddylation 作为类泛素化修饰的一种,尚无明确的研究证实其是否可以参与调节 EV 的生物发生。



研究原理

为探究Neddylation是否参与调节 EV 的生物发生,首先我们使用Neddylation 特异性抑制剂 MLN4924  探究 Neddylation 对EV 分泌的影响。接着,我们从调节 EV 生成的三个方面:MVBs 的早期形成、MVBs 靶向溶酶体降解、MVBs 与质膜的融合分别探究 Neddylation 在调控 EV 分泌中的作用,最终证实 Neddylation 通过靶向 MVBs 至溶酶体降解来抑制 EV 的生成。我们进而通过质谱分析找到在调控 EV 分泌过程中 Neddylation 修饰的底物蛋白 Coro1a,并证实了 Coro1a 在生理条件下可以发生 Neddylation 修饰,以及Coro1a 是 Neddylation 调控 EV 分泌过程所依赖的。随后我们明确了 Coro1a 发生 Neddylation 修饰的机制和主要修饰位点。之后,我们进一步探讨 Neddylation 修饰的 Coro1a 在 EV 生成中的作用以及其是否可以用作调节 EV 分泌的靶标,从而提示我们通过 Coro1a 介导的EV分泌调节来调控肿瘤的发展。


研究结果

我们首先发现 Neddylation 通过促进 MVBs 的靶向溶酶体降解从而抑制 EV 的分泌。进而,我们鉴定出 Neddylation 的新底物 Coro1a,以及与 Coro1a 的 Neddylation 修饰过程中相关的 E2 结合酶 UBE2F 和 E3 连接酶 TRIM4。在 TRIM4 的催化下,NEDD8 主要与 Coro1a 的第 233 位赖氨酸残基结合形成共价键。而后, Neddylation 修饰的 Coro1a (NEDD8-Coro1a) 与 Rab7 直接相互作用并将 Rab7 招募至 MVBs,从而促进 MVBs 的溶酶体降解,进而导致 MVBs 与质膜的融合减少和 EV 分泌降低。此外,通过体内肿瘤模型,我们证实 Coro1a 是通过减少 EV 分泌来抑制肿瘤进展的有效靶标。


NEDD8-Coro1a mediates the recruitment of Rab7 to MVBs

Inhibition of neddylated Coro1a-mediated increased EV secretion promoting tumour development progression


研究结论

我们的研究证实,Neddylation 在 EV 的生物发生中起着负调作用。同时,我们鉴定出 Neddylation 的新底物 Coro1a,明确了 Neddylation 修饰 Coro1a 招募 Rab7 促使 MVBs 靶向溶酶体融合从而调控EV的生成,从而揭示了调节 EV 生物发生的新机制,为调控 EV 生成和肿瘤治疗提供新的靶点。


文章内使用的抗体—Bioss相关推荐

 二抗

英文名称

裸抗货号

文献数量

标记二抗

Goat Anti-Rabbit IgG H&L

bs-0295G

90

HRP Cy3 Cy5 AP PE  FITC AF488 AF594 AF647 GOLD Biotin

Goat Anti-Mouse IgG H&L

bs-0296G

44

HRP Cy3 Cy5 AP PE  FITC AF488 AF594 AF647 GOLD Biotin

Donkey Anti-Rabbit IgG H&L

bs-0295D

3

HRP Cy3 Cy5 AP PE  FITC AF488 AF594 AF647 GOLD Biotin


 一

产品名称

货号

交叉反应

应用

PubMed

Rabbit anti-Rab7 (Cryo-EM)

bs-6703R

Mo Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

5

Rabbit anti-UBE2F

bs-8378R

-
-

-

beta-Actin (Loading Control)

bs-0061R

Mo Hu Rt

WB, IHC, FC, ICC

769

beta-Actin (Loading Control)

bsm-33036M

Hu

WB

55

Ki-67

bs-10837R

Hu

FC

-

Ki-67

bs-2130R

Mo Hu

IHC, FC, IF, ICC

62

Ki-67

bs-23101R

Hu

IHC, FC, IF, ICC

-

Ki-67

bs-23102R

Mo Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

3

Ki-67

bs-23103R

Mo Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

15

Ki-67

bs-23104R

Mo Hu

IHC, FC, IF, ICC

2

Ki-67

bs-23105R

Hu

IHC, FC, IF, ICC

3

Ki-67

bsm-33070M

Hu Rt

IHC, IF, ICC

5

Ki-67

bsm-51754M

Hu

IHC, IF, ICC

-

CD8

bs-0648R

Mo Hu

WB, IHC, IF, ICC

50

CD8

bs-10699R

Mo Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

2

CD8

bs-22849R

Hu

WB

-

CD8

bs-22852R

Rt

WB

-

CD8

bs-23447R

Mo

WB

-

CD8

bs-23448R

Mo

WB

-

CD8

bs-4790R

Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

3

CD8 alpha

bs-4791R

Rt

WB

4

C-Myc

bs-24507R

Hu

WB

-

C-Myc

bs-4963R

Hu

IHC, IF, ICC

17

c-MYC

bsm-51652M

Hu

WB

-

Myc tag

bs-0842R

Hu

WB, IHC, IF, ICC

1

Myc tag

bs-23166R

Fusion Protein

WB

-

Myc tag

bsm-33024M

Recombinant protein

WB

-

n-Myc

bs-22205R

Mo

WB

-

n-Myc

bs-5980R

Hu

IHC, IF, ICC

3

CD45

bs-0522R

Hu Rabbit

FC

14

CD45

bs-10599R

Mo Rt

FC

-

CD45

bs-10602R

Rt

FC

-

CD45

bs-4819R

Hu Rt

WB, FC

6

CD45

bs-4820R

Hu

FC

1

CD45

bs-7210R

Hu

FC

-

CD45

bsm-30095M

Hu

FC

-

CD45

bsm-33052M

Hu

WB

-

His tag

bs-0287R

Recombinant protein

WB

14

His Tag

bs-10582R

Recombinant protein

WB

-

His tag

bsm-33004M

Recombinant protein

WB

-

LAMP1

bs-1970R

Hu Rt

IHC, FC, IF, ICC

11

CD9

bs-22293R

Mo

WB

-

CD9

bs-23035R

Mo

IHC, IF, ICC

1

CD9

bs-2489R

Mo Hu Rt

WB, FC

9

CD9

bsm-52264R

Mo Hu

WB, IHC, IF, ICC

-

CD63

bs-1523R

Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

8

CD63

bs-23032R

Mo

IHC, IF, ICC

1

TSG101

bs-1365R

Hu Rt

WB, IHC, IF, ICC

6

TSG101

bsm-51699M

Hu

WB

-

TSG101

bsm-52746R

Mo Hu Rt

IHC, IF, ICC

-

CD81

bs-6934R

Mo Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

6

CD16

bs-6028R

Mo Hu Rt

WB, IHC, FC, IF, ICC

5

CD16

bsm-33096M

Mo

WB

-

CD32

bs-2573R

Hu

WB, FC

-

CD32

bs-4991R

Hu

WB

1

PD-1

bs-1867R

Mo Hu Rt

WB, FC

5

Granzyme A

bs-2578R

Mo

IHC, IF, ICC

-

Granzyme B

bs-1351R

Hu

IHC, FC, IF, ICC

3

Granzyme K

bs-6788R

Mo

WB

-

Annexin A1

bs-1562R

Hu Rt

WB, IHC, IF, ICC

2

TIM 3

bs-8766R

Mo Rt

WB, IHC, IF, ICC

2

Ubiquitin

bs-1549R

Mo Hu Rt

WB, IHC, FC, IF, ICC

1

Ubiquitin

bs-7944R

Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

1

Ubiquitin

bsm-33296M

Mo

IHC, IF, ICC

-

Ubiquitin

bsm-33307M

Mo Hu Rt

IHC, IF, ICC

-

Ubiquitin

bsm-33443M

Mo

IHC, IF, ICC

-

Cullin 1

bs-4208R

Hu

IHC, IF, ICC

-

Cullin 3

bs-4211R

Hu

WB

1

CORO2B

bs-13997R

Mo Hu

IHC, IF, ICC

-

CORO6

bs-13998R

Mo

WB

-

CORO7

bs-13999R

Hu

IHC, IF, ICC

-

Coronin 3

bs-6799R

Mo

IHC, IF, ICC

-

ALIX

bs-6767R

Mo Hu Rt

WB, IHC, IF, ICC

1

Flag Tag

bs-0965R

Recombinant protein

WB

1

Flag Tag

bsm-33346M

Recombinant protein

WB

-

HA tag

bs-0966R

Recombinant protein

WB

-

EEA1

bs-11250R

Hu

IHC, IF, ICC

-

HGS

bs-15473R

Rt

IHC, IF, ICC

-

GM130

bs-8155R

Rt

IHC, IF, ICC

-

MON1A

bs-17711R

Hu

WB

-

MON1B/HSRG1

bs-17712R

Mo

IHC, IF, ICC

-

RAB7

bs-6703R

Mo Hu

WB, IHC, FC, IF, ICC

-

产品信息以官网为准

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