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精品推荐 | 流式常用同型对照-北京博奥森生物技术有限公司
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精品推荐 | 流式常用同型对照
发表者:北京博奥森生物      发表时间:2022-1-10


同型对照是什么?

同型对照 (Isotype control) 是一种与一抗保持相似特性但缺乏特异性靶标的抗体。在流式实验中,同型对照作为阴性对照,可以区分特定抗体信号与非特异性背景染色,能够排除干扰因素以确保实验结果的准确性。同型对照还可以用于设定流式细胞仪的电压,并有效节约实验成本。


产生背景染色的原因?

1.抗体与靶细胞的 Fc 受体、内源性酶、死细胞等因素的非特异性结合产生的背景染色。

2.细胞本身的荧光产生的背景染色。

3.流式仪器产生的背景染色。

图1. HepG2 和 A549 细胞通过使用抗体 Caspase-3 (bs-0081R-FITC) 进行流式细胞检测,蓝色为空白对照,黄色为同型对照,绿色为特异性一抗。流式实验中根据同型对照设置阴性阈值。



什么情况下应使用同型对照?

同型对照也不是适用于所有情况。同型对照仅能检测不由表位引起的非特异性结合,而相似表位不同抗原,或不同表位相同抗原产生的交叉反应就不能被同型对照检测。在以下情况中,实验人员应使用同型对照以确保流式实验的准确性:

1.实验人员流式实验经验较少时应使用同型对照;2.进行胞内流式实验,包括胞内因子,趋化因子,蛋白信号等应使用同型对照;3.使用不常见或特异性不高的抗体时应使用同型对照。


如何选择同型对照?

在实验中选择的同型对照需要与一抗的特性相匹配。合适的同种型对照应与一抗的宿主种族、Ig亚型、偶联物、轻链和工作浓度相同。在流式实验中,选择合适的同型对照可以有效排除干扰因素,实现更精确的数据分析。而选用 PBS 作为空白对照则达不到同样的效果,甚至可能误导试验结果。


流式检测中的常用同型对照

抗体名称

标记荧光素

货号

Mouse IgG1

FITC

C03-11001

PE

C03-11002

PerCP

C03-11003

Mouse IgG2a

FITC

C03-12001

PE

C03-12002

PerCP

C03-12003

Mouse IgG2b

FITC

C03-13001

PE

C03-13002

PerCP

C03-13003

Mouse IgG

FITC

bs-0296P-FITC

PE

bs-0296P-PE

APC

bs-0296P-APC

AF488

bs-0296P-A488

AF594

bs-0296P-AF594

AF647

bs-0296P-A647

CY3

bs-0296P-CY3

CY5

bs-0296P-CY5

Rat IgG

FITC

bs-0293P-FITC

PE

bs-0293P-PE

APC

bs-0293P-APC

AF488

bs-0293P-AF488

AF594

bs-0293P-AF594

AF647

bs-0293P-AF647

CY3

bs-0293P-CY3

CY5

bs-0293P-CY5

Rat IgG

FITC

bs-0295P-FITC

PE

bs-0295P-PE

APC

bs-0295P-APC

AF488

bs-0295P-AF488

AF594

bs-0295P-AF594

AF647

bs-0295P-AF647

CY3

bs-0295P-CY3

CY5

bs-0295P-CY5


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