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精品推荐 | 流式常用同型对照

发表者：北京博奥森生物发表时间：2022-1-10

同型对照是什么？

同型对照 (Isotype control) 是一种与一抗保持相似特性但缺乏特异性靶标的抗体。在流式实验中，同型对照作为阴性对照，可以区分特定抗体信号与非特异性背景染色，能够排除干扰因素以确保实验结果的准确性。同型对照还可以用于设定流式细胞仪的电压，并有效节约实验成本。

产生背景染色的原因？

1.抗体与靶细胞的 Fc 受体、内源性酶、死细胞等因素的非特异性结合产生的背景染色。

2.细胞本身的荧光产生的背景染色。

3.流式仪器产生的背景染色。

图1. HepG2 和 A549 细胞通过使用抗体 Caspase-3 (bs-0081R-FITC) 进行流式细胞检测，蓝色为空白对照，黄色为同型对照，绿色为特异性一抗。流式实验中根据同型对照设置阴性阈值。

什么情况下应使用同型对照？

同型对照也不是适用于所有情况。同型对照仅能检测不由表位引起的非特异性结合，而相似表位不同抗原，或不同表位相同抗原产生的交叉反应就不能被同型对照检测。在以下情况中，实验人员应使用同型对照以确保流式实验的准确性：

1.实验人员流式实验经验较少时应使用同型对照;2.进行胞内流式实验，包括胞内因子，趋化因子，蛋白信号等应使用同型对照;3.使用不常见或特异性不高的抗体时应使用同型对照。

如何选择同型对照？

在实验中选择的同型对照需要与一抗的特性相匹配。合适的同种型对照应与一抗的宿主种族、Ig亚型、偶联物、轻链和工作浓度相同。在流式实验中，选择合适的同型对照可以有效排除干扰因素，实现更精确的数据分析。而选用 PBS 作为空白对照则达不到同样的效果，甚至可能误导试验结果。

流式检测中的常用同型对照