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不推荐你用直标一抗的理由只有一个,推荐你用的理由却很多......-北京博奥森生物技术有限公司
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不推荐你用直标一抗的理由只有一个,推荐你用的理由却很多......
发表者:北京博奥森生物      发表时间:2022-4-21

免疫学实验方法为相当多生命科学问题的解决提供了重要的解决方案。从WB到IHC,从IP到FC,抗体已经在蛋白质科学、毒理学和病理学等相关的研究中,占据了无可动摇的核心地位。传统免疫学实验方法通常需要使用“二抗”作为靶标抗体和检测标记间的转换器,这样一类方法被形象地称为“间接免疫法”。这样做的主要好处是可以在一定程度上放大靶标特异性的信号。同时,由于抗体标记操作可以大批量进行,二抗的引入在一定程度上可以降低标记过程的成本。


但是,由于样本中内源性Ig的影响,应用二抗往往会产生较多的非特异性信号。这一现象在组织或细胞培养用血清和一抗种属来源相同时格外严重,严重时会造成靶标信号湮灭。为了去除组织中内源性Ig的干扰,获取动物组织前进行心脏灌注往往是必要的。但是灌注过程对操作者的实验技术和试剂的清洁性具有较高的要求,不适当的灌流往往会造成组织内栓塞形成而降低灌流效果,有时甚至会造成样本中蛋白质降解导致实验失败。使用二抗同时意味着增加了孵育次数,这使得实验的时间被延长。



随着时间的推移,越来越多的人们意识到:直接标记一抗可以解决以上问题。直标一抗可以直接结合靶标而不受内源抗体的影响,毫无疑问,这降低了背景信号干扰,提升了对样本前期准备阶段的容错率(包括清洗和灌流等)。此外,直标一抗在应用于流式细胞分选时,大大降低了二抗非特异性吸附导致细胞错分的几率。直标一抗孵育后,简单清洗即可直接进行下一步检测,节省实验步骤与宝贵的实验时间,并降低失误的几率。因此,越来越多的实验室研究人员(特别是国外高端实验室),已经开始逐步将传统的间接免疫方法置换为一抗直标方法。使用直标一抗发表的各类文章已获得学术界的广泛接受。

显然,直标一抗的价格往往略高于未标记的单抗。但是考虑到节省掉的二抗和时间成本,有限的一抗成本提升显得微不足道。况且,直接标记法避免了二抗带来的非特异性信号风险,这意味着直标一抗可以避免掉相当多的假阳性试验结果,因此获得到的数据更有真实性以及说服力。尽管对于一小部分丰度极低的靶标来说,间接免疫法带来的信号放大仍提供了一些优势。但是近期正在高速发展的酪酰胺信号放大技术(TSA技术)能够更加根本地解决这个问题。可以预见,HRP直标一抗与TSA技术的联合使用,将会在不牺牲分辨率和信号强度的前提下进一步提高样本检测的信噪比,从而带来蛋白组织或亚细胞分布解析覆盖度和精度的再一次巨大的飞跃!


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博奥森生物可对抗体、蛋白、多肽、小分子化合物等多种物质进行常规标记物标记。目前可标记的荧光物质包括:

酶标记物:碱性磷酸酶 (AP/ALP),辣根过氧化物酶 (HRP);

常规荧光素与荧光蛋白:FITC,Rhodamine B (RBITC),藻红蛋白 (PE),别藻蓝蛋白 (APC);

Cy系列荧光素:Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7;

AF系列荧光素:AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750;

其它:生物素 (Biotin),胶体金标记(Co-Au);

荧光双标记:

PE-Cy荧光素系列:PE-Cy3, PE-Cy5, PE-Cy5.5, PE-Cy7;

APC-Cy荧光素系列:APC-Cy3, APC-Cy5, APC-Cy5.5, APC-Cy7;

PerCP-Cy荧光素系列:PerCP-Cy3, PerCP-Cy5, PerCP-Cy5.5, PerCP-Cy7。


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