免疫学实验已经成为蛋白质科学研究领域难以替代的重要实验方法。通过将“可以与待测分子结合的特异性抗体”和“易于被检测到的标记物”二者相偶联的方法，研究人员已经获得了高效且特异检测样本中靶标的有效工具。而且随着检测手段的更新迭代，越来越多的标记物类型也花样翻新，大有“乱花渐欲迷人眼”之势。那么，如何才能在种类繁多的抗体偶联物中找到合适自己的那一个呢？今天就让我们为你拨开迷雾，一探究竟。

  其实，作为标记的偶联物种类虽多，但其实最常用偶联物只有3个大类，即：酶标记、荧光标记和生物素标记。

       酶标记的首选毫无疑问是辣根过氧化物酶 (HRP) 。HRP能通过催化有过氧化氢参与的一系列氧化还原反应并释放信号，而被广泛应用于免疫印迹 (WB), 酶联免疫吸附 (ELISA), 以及免疫组织化学 (IHC) 等实验中。由于HRP自身稳定性强且催化效率高，因此可以通过很简单的操作，有效放大中低丰度靶标的信号，因此能够适应大多数检测情境。酶标记中的另外一种是碱性磷酸酶 (AP) 标记，常常是通过催化磷酸酯底物的去磷酸化显色反应而达到检测目的。与HRP相比，AP标记过程中酶活性损失更大、稳定性低且反应时间长，因此对制备和检测操作都提出了较高要求。但是得益于AP独特的最适pH和催化稳定性，这使得AP在碱性条件或对结果稳定性要求苛刻的特殊场合下，具有比HRP更好的工作性能。

  HRP标记往往是样本单靶点检测的首选，但当需要对同一样本中的多个靶点进行多通道检测时，荧光标记抗体则提供了一种更好的选择。各类荧光标记，如：AF系列、Cy系列、FITC、罗丹明等为研究人员们提供了极大地选择空间，因此被广泛应用于免疫荧光染色 (IF), 流式细胞术 (FC), 和荧光免疫印迹 (FWB)实验中。选择荧光标记时，荧光相对强度和光谱分离度的选择最为重要。由于激光光源、检测设备等的不同，不同的荧光标记在不同的设备上具有不同的荧光强度。因此，选择荧光标记物时，需要结合实验室设备的特点和蛋白丰度，以确保最亮的标记物和表达水平最低的蛋白相互组合。此外，“串光”问题会在荧光实验中带来非常大的不利影响，并直接影响结果的可信度。因此，荧光标记物发射光谱应尽可能地彼此远离，以避免邻近通道间荧光信号的串扰。如果难以确认最佳荧光标记的种类，优先去尝试AF488, Cy5, FITC, PE等文献中最常用到的荧光标记通常是较为稳妥的选择。

 好的开始是成功的一半，辛苦实验的你不需要为选择标记抗体而苦恼。给博奥森一份信任，我们还你的不只是一支好抗体！