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干货丨抗体标记经验总结-北京博奥森生物技术有限公司
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干货丨抗体标记经验总结
发表者:北京博奥森生物      发表时间:2022-5-30


导读:

荧光抗体标记技术是将荧光标记物以化学方法与特异性抗体共价结合,在抗体-荧光结合物与对应的抗原特异结合后,通过荧光显微镜等仪器设备观察荧光标记物的信号情况,从而实现对待检物的定位、定性或定量检测。在实验过程中,我们经常会遇到如何选择荧光标记物、多重荧光检测时如何进行荧光标记物的搭配等问题。为此,小编特意采访了Bioss抗体标记专家,让我们一起听听专家的分享吧~


Q1:市面上的荧光标记物很多,如何判断一个荧光标记物是否适合标记抗体呢?

作为标记的荧光标记物应符合以下要求:

 具有能与抗体形成共价键的化学基团,且与抗体结合后不易解离,同时未结合的荧光标记物及其降解产物易于清除;

 荧光效率高,在与抗体结合后仍能保持较高的荧光效率;

● 与抗体结合后不影响抗体原有的生化与免疫性质;

● 标记方法简单,安全无毒;

● 与抗体结合稳定,终产物易于保存。


Q2:在Bioss实验室,经常用到哪些荧光标记物,可以推荐一些吗?

Bioss实验室可以提供基于29种标记方式的标记抗体产品及标记服务,比较常用的有:

 小分子荧光素:FITC, Rhodamin

 Cy系列:Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7

● Alexa Fluor系列:AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750

 荧光蛋白:PE, APC, PerCP

● 荧光串联标记:PE-Cy, PerCP-Cy等


Q3:以上提到的荧光标记物,经常会用于哪些实验呢?

下表汇总了不同种类荧光标记物的适用实验类型,供大家参考


Q4:对于有多重荧光检测需求的实验应用,比如多重免疫荧光检测和流式细胞术等,在做多重荧光染色方案设计时,需要遵循哪些原则?

在Bioss实验室,我们做多重荧光检测设计实验时,一般会遵循以下原则:

● 确认检测设备的参数:荧光显微镜通常是一个卤素光源配若干个滤光片,流式细胞仪通常是2-3个激光管配若干个检测通道;

 在可选范围内选择更强的荧光,常用荧光及其强弱程度排序: PE>APC>PE-Cy5>PE-Cy5.5/PerCP-Cy5.5>FITC;  

 细胞表面蛋白可以选择PE等荧光蛋白,需要进入到细胞内的检测,尽量选择小分子荧光素;  

● 对荧光多重染色,荧光素与抗体组合需要考虑目的抗原的含量,样本中含量低的指标优先选择荧光较强的荧光素。如果是分步加入荧光抗体,考虑到荧光的衰减,按照荧光素的强弱排序依次加入。


若有其他关于标记方面的问题,欢迎留言,我们的技术专家会及时与您沟通探讨。


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