免疫组化(IHC) 作为实验必备技能之一，具有特异性强，灵敏度高，将形态、功能和定位密切结合等优势，现已成为临床病理不可或缺的辅助手段。但其实验步骤繁琐，存在许多变量，经常很难获得最优的结果，因此需要对一些实验流程的变量（例如样品制备、抗原修复以及抗体孵育时间等）进行调整实现优化。

      IHC实验步骤繁琐，包括切片制作（固定，脱水，透明，包埋，切片，贴片，烤片），脱蜡，水化，阻断，抗原修复，封闭，一抗孵育，二抗孵育，显色，复染，封片和分析等，在上次的推文中向您介绍了封闭和一抗孵育两个步骤中的常见问题及解析，本次为您带来的是二抗孵育和显色过程中的注意事项。文末还附有IHC通关的秘密武器——Bioss全新上市的IHC即用型试剂盒，助您一次获得CNS级的图像结果。

二抗孵育

1.阳性检测率及着色强度相对减弱，甚至无染色

2.图片背景值过高

3.染色结果出现非特异性染色

4.DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色

显色

1.阳性检测率及着色强度相对减弱，甚至无染色

2.图片背景值过高

3.产生深棕至黑色的DAB絮状或团状沉积

4.阳性检测率及着色强度相对增强

5.切片着色不均匀，如一片着色，一片不着色或着色深浅不一

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      受篇幅限制，本次IHC实验过程中的常见问题解析就先分享到这里。如果您还想更深入的学习IHC相关问题，可以继续关注本系列后续文章。Bioss供应科研使用高品质IHC抗体及全套配套试剂，为您提供一站式解决方案。如果您在使用我们的产品时出现任何问题，请随时联系我们，Bioss资深IHC实验专家将为您全面讲解，深度分析，帮助您轻松解决IHC的“疑难杂症”！