简介：<br />
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。<br />
RIPA裂解液的主要成分为主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS、EDTA等，另加有蛋白酶抑制剂Aprotinin等可以有效抑制蛋白降解。<br />
<br />
使用说明：<br />
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。<br />
1、样品前处理：<br />
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。<br />
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。<br />
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。<br />
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。<br />
2、后处理：<br />
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。<br />
<br />
注意事项：<br />
1、 因SDS在低温易析出，如发现RIPA有沉淀，请先使其恢复室温，沉淀即可溶解。<br />
2、 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。<br />