文章信息
期刊：ACS nano
影响因子(IF)：13.903
文章名称：Overcoming the Reticuloendothelial System
Barrier to Drug Delivery with a “Don’t-Eat-Us”
Strategy(点击获取全文)
作者：唐宜轩博士
作者单位：西南大学
引用抗体：anti-F4/80｜bs-11182R
anti-ZO-1｜bs-1329R
anti-Claudin5｜bs-10296R
Goat Anti-Rabbit IgG antibody/AF488｜bs-0295G-AF488
Goat Anti-Rabbit IgG antibody/HRP｜bs-0295G-HRP
Donkey anti-rabbit IgG/APC｜bs-0295D-APC
文章摘要
制剂的长循环递送是提高药物在靶部位累积及疗效的重要前提。因此，富含巨噬细胞的网状内皮系统（RES）成为了纳米药物临床开发的重要挑战。为了克服该阻碍，基于CD47蛋白与巨噬细胞表面受体SIRPα蛋白互作后激发“don’t-eat-me”信号通路能够抑制巨噬细胞的吞噬作用，我们开发了一种新型的特异性的网状内皮系统（RES）封闭策略。该策略采用少量的多肽脂质体可实现对RES的长期特异性封闭。首先，我们设计了一种CD47蛋白衍生的耐酶解的D型Self肽（DS），并将其标记在脂质体上（DSL）。静脉给药后，DSL进入体内后会快速与吞噬细胞作用。而DS与SIRPα的互作使DSL能够长期抑制巨噬细胞的吞噬能力，使后续注射的纳米制剂可以避免被巨噬细胞识别。该策略为长循环递药研究提供了新的思路，并且因为无需对递送系统进行额外化学修饰，该策略可与各类靶向递药系统联用， 因此具有广泛的应用前景。
文中采用了Bioss公司的F4/80抗体（bs-11182R）、ZO-1抗体（bs-1329R）和Claudin5抗体（bs-10296R）对肝驻留巨噬细胞、脾巨噬细胞以及脑微血管内皮细胞进行一抗标记，并分别采用了Alexa Fluor 488及CY3标记二抗进行荧光标记。进而使作者可以顺利对纳米制剂和吞噬细胞进行共定位成像分析，为文章结论提供了支撑。
图1. 预注射DSL可提高PLGA NPs在体内的循环时间。（a）PLGA NPs的体内和（b）体外荧光成像。（c）血液中DiD药-时曲线及（d）消除半衰期和（e）AUC，* p <0.05，** p < 0.01，*** p <0.001; NS表示不显著；数据结果显示为mean± SD（n = 3）。（f）PLGA NPs和巨噬细胞/肝窦内皮细胞的荧光共定位成像。巨噬细胞以F4 / 80（绿色）标记，肝窦内皮细胞用CD31（卡其色）染色，PLGA NPs显示为红色，比例尺= 20μm。
图2. 脂质体和库普弗细胞（KCs）/肝窦内皮细胞（LSECs）的免疫荧光共定位。脂质体注射24h后的肝脏切片。（a）库普弗细胞以F4 / 80（绿色）标记，（b）肝窦内皮细胞以CD31（绿色）标记，脂质体以 Liss rhod PE EPC （红色）标记。
图3. bEnd.3 细胞中ZO-1及claudin 5的亚细胞定位。细胞在盖玻片上孵育10天，用4%PFA固定并用0.1%TritonX-100处理后，细胞分别用ZO-1抗体（1:100）和Claudin5抗体（1:100）进行染色，然后使用Alexa Fluor488 二抗孵育。DAPI（5μg/mL）染色5分钟后HCS观察。
（感谢唐宜轩博士和《ACS NANO》提供素材！侵删！）
Bioss相关抗体
CD31 bs-0195R 
交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep
产品应用: WB=1:500-2000 Flow-Cyt=1μg/Test
应用: Western Blot 应用: Flow cytometry
样本: Human U937 样本: Human HL60
稀释度: 1/300 稀释度: 3μg/1x106 cells
SIRPα bs-2708R
交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse
产品应用: WB=1:500-2000 Flow-Cyt=1μg /test
应用: Western Blot 应用: Flow cytometry
样本: Mouse Spleen&Bone 样本: Human U937
稀释度: 1/300 稀释度: 3μg/1x106 cells
